细菌是我国重要的生物资源。针对菌种自身的遗传性和变异性，在菌种保存过程中，如何降低菌种衰败率，防止杂菌污染，保持菌种遗传特性不发生变异，保证菌种的优质、高品质。-产生菌株。该菌株早已应用于生产，已成为食用菌领域的一个重要课题。为了满足大规模生产的需要，介绍了几种简单易行、实用有效的菌株保存方法。

1.菌种保存的基本原则

通过低温、干燥、缺氧、饥饿等手段最大限度地降低菌丝体的生理代谢。首先要选择优良的纯菌种，包括菌丝体及其孢子；其次，根据微生物的生理生化特性，人为地创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制微生物的新陈代谢，使其生命活动减少到极致。降低程度或处于休眠状态，从而延长菌株的寿命并保持其原有特性，防止突变。

2.菌株保存方法

试管斜应变系列保存方法

1、低温定期移植保存法

将需要保存的菌株接种到合适的斜面培养基上，在适当的温度下培养。当菌丝体在斜面生长旺盛时，取出置于3~5低温干燥处或4冰箱保存。每3~6个月移植、转管一次，具体决定应根据菌种特性而定。存放时注意环境湿度不要太高，防止霉菌通过棉塞进入管内。因此，如果使用卫生棉条，可用干净的塑料薄膜或牛皮纸包裹，或使用无菌白色橡皮塞并用石蜡密封，以减少污染机会并防止培养基变干。除草菇外，大多数食用菌菌株都可以用这种方法保存。

2、液体石蜡保存法

将化学纯的液体石蜡放入锥形瓶中高压灭菌，然后放入40培养箱中蒸发水分，直至石蜡油完全透明。使用前将处理后的石蜡油转移至空白斜坡上，在28-30下孵育2-3天，直至证明无外来细菌生长为止。然后将母种嫁接到斜面培养基上。当菌丝体在斜面上长得丰满时，向斜面注入液体石蜡。注射量应比斜面高1cm，以将细菌与空气隔离，降低其代谢能力。用已消毒的白色胶塞将管口塞紧，用石蜡密封，直立存放于室内干燥处或冰箱内。一般可保存1年以上，低温下可延长保存时间。使用时，从斜面上挑取少许菌丝体，转移到新鲜的斜面培养基上进行培养。由于菌丝体被液体石蜡染色，影响其生长，需要再次移植才能恢复正常生长。

3、白色胶塞密封保存方法

选择与试管口径相匹配的白色胶塞，用0.2%甲酚肥皂溶液清洗，并浸泡在酒精中备用。当试管斜面布满菌丝时，在无菌条件下取下棉塞，取浸湿的白色胶塞，通过火焰快速插入试管口，用石蜡密封。这种方法可以达到与石蜡油封类似的效果。用这种方法保存的菌种可以存活13年，但最好每年移植一次。

4、蒸馏水保存方法

将8个成熟试管菌株放入接种盒中，注入蒸馏水，将培养基整个斜面淹没至距管口2cm处。用白色胶塞塞紧管口，用石蜡密封，室温阴凉处保存。可保存1年左右。

非倾斜固体培养物系列保存方法

1、麦麸保存方法

将麦麸与水按0.80:1的比例充分混合，放入试管中高压灭菌，无菌试验合格后接种，在适当的温度下培养至菌丝体发育良好，然后放入将试管放入真空干燥机中。用真空泵吸干麦麸培养基中的水分，然后移入装有硅胶的干燥器中，用凡士林密封，室温保存。可保存3至5年。

2、小麦籽粒保存方法

取优质小麦，洗净浸入20水中5小时，取出稍干，放入试管中，占管深1/3，高压灭菌，摇匀趁热起来。冷却后，插入菌丝体，在适当的温度下培养。待菌丝长满基质后，用石蜡密封，置于冰箱或20以下干燥处。可保存1至2年。

3、木片保存方法

将阔叶树片78%、麦麸20%、蔗糖1%、石膏粉1%混合，加水混匀，放入试管灭菌，插入斜面菌种，培养将其置于适当的温度下，直至菌丝体长至试管的2/3时，用石蜡密封，低温或室温保存。一般可保存1至2年。

4、稻草粉保存草菇菌种

草菇斜面菌种在24保存2天后就会失去活力。室温保存时，斜面培养基失水过快，影响菌株的存活。利用秸秆粉保存草菇菌种有其独特的优点。配方为75%秸秆粉、22%麦麸、1%石膏粉、1%碳酸钙、1%蔗糖、适量水，拌匀并调节湿度。放入试管高压灭菌后，照常接种、培养。当菌丝长至试管的2/3时，用石蜡将试管口的棉塞密封。常温保存至翌年，不会影响其活力和品种品质。

液体系列菌株保存方法

1、生理盐水保存法

将待保存的菌种插入马铃薯培养基中，将60mL培养基放入250mL三角瓶中，振荡培养或每天振荡510次，持续57天，然后吸入形成的菌丝体。用无菌吸管球。将5mL无菌生理盐水试管放入试管中。每管移入45个菌丝球，塞上无菌白色胶塞，用石蜡密封，低温保存12年。

2、营养液保存方法

营养液的配方为20%马铃薯汁、2%葡萄糖、0.3%磷酸二氢钾、0.15%硫酸镁、微量硫酸铵。每个试管含有5mL。灭菌后，用无菌吸管将45个生理盐水保存深培养的菌丝体吸至试管中。将它们存放在10至25C的室温下。它们可以存活2到3年。其效果优于生理盐水保存法。不影响菌株形成子实体的能力。

3、无菌水保存法

首先将培养的斜面菌株剪成小片，将培养基移入盛有适量无菌蒸馏水的试管中，用白色橡皮塞密封，室温20左右保存。可以存活1到2年。磷酸盐缓冲液也可用作保存液。缓冲液的pH值取决于每个保存菌株生长的pH值。该方法简单、易操作。

一系列利用孢子保存菌株的方法

1、滤纸片的保存方法

取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）滤纸，剪成4.0cm0.8cm小纸条，平放在培养皿中，用纸包裹灭菌。使用钩悬浮法收集孢子，并使孢子落到滤纸条上。将含有孢子的滤纸条放入保存试管中，用白色橡皮塞密封，然后将保存试管放入干燥器中12天，除去滤纸上的水分，然后在室温下保存。低温。储存期可达2至10年。

2、砂管保存方法

取河沙，用水浸泡洗涤数次，过60目筛除去粗颗粒，加1%稀盐酸煮沸30分钟除去有机物，然后冲洗干净用水搅拌至pH值达到中性，晾干备用。同时，取非耕层中的贫黄土或红土，用水反复冲洗至中性，干燥，磨成细粒，过100目筛，与加工好的混合料混合均匀。将沙子和土壤按2至4：1的比例混合，然后分成小试管。每管装0.5g，高压（1.5kg/cm2）灭菌3次，然后干热灭菌（160，2h）1次。经无菌检验合格后方可使用。在无菌条件下向已形成孢子的坡菌中注入3mL无菌水，刮去菌苔制成菌悬液，然后用无菌吸管吸干菌液滴入沙管中，直至沙子浸湿。将孕育砂管放入装有干燥剂的真空干燥器中，连接真空泵抽气，直至砂干燥。真空干燥操作需在孢子插入后48小时内完成，以防止孢子萌发。准备好的沙土管用石蜡密封，可在低温下保存2至10年。

此外，还有甘油保存法、枝条保存法、超低温液氮保存法、冷冻真空干燥法等。保存菌株的方法虽然有很多种，但各有其优缺点。其中，低温定期移植保存法简单易行，不需要特殊设备，但需要每隔几个月进行一次管移植。转管次数越多，突变的可能性就越大，很容易造成菌株衰落。

近年来，人们找到了一种目前被认为最有效、最广谱、最安全的保存方法————超低温液氮保存方法。ATCC采用这种方法来保存双孢蘑菇。该菌株在9年后保持稳定，这是目前国际上公认的理想状态。保存细菌菌株的方法。但需要液氮储罐设备，液氮来源有限且价格昂贵。仅少数科研机构使用，无法推广。此外，还有冷冻真空干燥法，一般可保存10年以上，但成本较高。

3.菌种保存效果鉴定

常用的指标是菌株存活率和接种物存活率。为了准确判断菌株保存后是否发生突变，需要从以下四个方面进行观察和测量：生物学特性，如菌丝形态、颜色等；分解基质的能力，如细菌运动、进料速度等；遗传特征，如相关酶的酶谱和酶活性；食用菌生产能力，包括产量和品质。通过频繁的检查，没有表现出任何退化迹象的菌株赢得了蘑菇种植者的信任。通过对菌株保存效果的鉴定，可以改进保存方法，使保存体系更加完善。